Комбинирование методов

Очень часто для повышения эффективности диагностики соединяют несколько методов. Специалистами ЦКП «Орловский региональный центр сельскохозяйственной биотехнологии» была предложена подобная модель биомониторинга, направленная на профилактику развития фузариоза овощных культур на дальнейших этапах вегетации.

Модель биомониторинга довизуальных проявлений грибной инфекции методом ИФА и ПЦР-анализом.

Применяемый биомониторинг включает в себя комплексный контроль скрытого (довизуального) проявления болезней овощных культур защищенного грунта в течение всего вегетационного периода методами биоиндикации (по морфологическим характеристикам овощных культур) и биотестирования (иммуноферментный анализ на наличие инфекции и ПЦР-анализ количественной нагрузки возбудителем) с целью корректировки интегрированной защиты культур биопрепаратами. Модель применяемого метода мониторинга представлена в табл. 7.

Таблица 7

Модель метода биомониторинга заражения возбудителями болезней овощных культур защищённого грунта

* Растение здорово.

** Требуется корректировка интегрированной защиты.

В результате методом ИФА качественно подтверждается наличие или отсутствие инфекции в культурах в указанные периоды вегетации. При превышении показателя оптической плотности >1, необходимо дополнительно проведение количественной нагрузки методом ПЦР для корректировки интегрированной защиты овощных культур [92].

В ФГБУ ВНИИКР проводили исследования по одновременной диагностике патогенных вирусов овощных культур и их насекомых переносчиков с помощью комбинированного анализа ИФА и ПЦР. На первом этапе лабораторных исследований происходит тестирование образцов с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) коммерческими наборами к INSV и TSWV производства фирмы Adgen (Шотландия), устанавливаются пораженные вирусом растения. Для подтверждения результатов ИФА применяются праймеры INSV S1/S2 для классической ОТ-ПЦР с детекцией электрофорезом, описанные в Диагностическом протоколе ЕОКЗР 7/034 (ОЕРР/ЕРРО (2004)), с помощью коммерческих наборов для выявления INSV методом ПЦР в реальном времени, производимых фирмой ЗАО «Синтол» (Россия), а также с праймерами и зондом INSV F/R/P (Chenetal, 2013). Все положительные образцы, выявленные методом ИФА, подтверждаются ПЦР. На следующем этапе проводится оценка возможности использования праймеров и зонда для ПЦР в реальном времени для идентификации распространителя инфекции трипса в подкарантинном материале. Такой подход должен повысить точность исследований, а также сократить сроки их проведения. В случае наличия в выявленных векторах вируса, можно рекомендовать проведение фитосанитарных мероприятий одновременно и по отношению к карантинным вирусам в местах выявления насекомых-переносчиков [123].

Для отработки способов устранения влияния вирусной инфекции на урожайность и качество плодов на ОПБ ВНИИССОК в условиях малообъемной гидропоники на растениях перца сладкого проводилась диагностика вирусной инфекции очагового характера. Было выявлено два типа проявления симптомов. Результаты иммуноферментного анализа и экспресс-метода с использованием иммунострипов позволили идентифицировать вирус табачной мозаики (ВТМ). Проведенная в условиях открытого грунта иммунологическая оценка показала смешанную вирусную инфекцию ВТМ+ВОМ, степень развития болезни доходила до 37,5 %. При электронной микроскопии в соке инфицированных растений перца с симптомами зеленой и желтой мозаики обнаружены палочковидные частицы вируса табачной мозаики размером 30 нм [124, 125].

Источник: Методы диагностики возбудителей заболеваний овощных культур: аналит. обзор. –М.: ФГБНУ «Росинформагротех», 2020. – страница 89-91